在此次制备案例中，将使用SepaBean machine U200搭配330g SepaFlash标准系列正相分离柱（无定型硅胶，40-63μm，60Å，S-8101-0330）进行小试的分离方法摸索并进行分离方法放大，放大采用预装3000g SepaFlash标准系列正相分离柱（无定型硅胶，40-63μm，60Å，S-8101-3000） 与SepaBean machine L快速液相制备色谱系统联合使用，将单次上样量从25g成功提高至约300g粗品混合物，不但获得高纯度的产品，且节约了时间和溶剂成本，为大量制备样品提供了新方案。

实 验 部 分 

样品信息

待纯化样品来源于某高校，且不能提供结构式等具体样品信息。

制备参数

样品本身为液态，小试样品采用固体上样方式，样品量为25g溶解于乙酸乙酯中加入硅胶进行拌样，旋干，等待上样。

由于干法上样对于大量样品操作不便，因此放大方法采用液体进样方式，客户样品本身为液态，不需处理，直接等待进样。

本次分离采用梯度洗脱，上图1即为本次分离的色谱图，1、2号峰为杂质1，该杂质对于后续的实验影响较小，3号峰为目标组分，该组分在254nm和280nm响应较弱。最终得到约10g目标组分。同时通过本次分离，得知目标组分出峰时的溶剂比例为在10%左右，为大量样品的分离提供了比较准确的信息。

本次分离采用等度洗脱，便于客户回收溶剂。上图即为本次分离的色谱图，峰型较为正常，1号和2号峰为杂质1，该杂质对于后续的实验影响较小；3号峰为目标组分，易拖尾，4号峰由纯乙酸乙酯冲洗而出的杂质2，最终得到约150g纯品。

（3）分离柱后处理：

注意事项：

1、SepaFlash分离柱生产采用干法装填技术，重复使用柱子的前提是过程中不能有干床现象发生。若有干床现象发生，填料柱床将不再均匀分布，分离柱的性能将无法复原。

2、分离柱每次使用后，需使用乙酸乙酯冲洗柱床3-5 CV，并保存在乙酸乙酯中。以3kg分离柱为例，其柱体积为3850 mL，每次分离测试后我们需要另外准备11.6 L-19.3 L乙酸乙酯用于分离柱的冲洗和保存。